аЯрЁБс>ўџ 57ўџџџ4џџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџьЅС#` №RП=bjbjЁЁ.УУtџџџџџџЄtttttttˆŒŒŒŒ ˆЂРРРРРŸ Ÿ Ÿ јњњњњњњ$?hЇn9t6› Ÿ 66ttРРлWМММ6BtРtРјМ6јММttМРД  <#Мn“ЧŒxjМјm0МтаЭМ”Љ$tМ<Ÿ ’1 hМ™ Tэ IŸ Ÿ Ÿ В Ÿ Ÿ Ÿ 6666ˆˆˆŒˆˆˆŒˆˆˆttttttџџџџ Screening for Targeted Clones in a 96-well Plate NIBS12-04-06 1. When your 96-well plates containing putatively targeted clones have arrived, lyse the cells with lysis buffer, 50 Еls/well, incubated at 55АC, overnight. Use multi- channel pipettor to add solutions. Wrap plates with parafilm to prevent evaporation. 4. Add cold NaCl+EtOH solution (150Мl 5M NaCL in 10 mL cold 100%EtOH), 100 Еls/well. Let sit 30-60 minutes at room temperature. 5. Spin in 96-well plate holder centrifuge, 2500 rpm, 5 minutes. 6. Invert to decant off liquids. Blot on paper towel. 7. Rinse with 100 Еls cold 70% EtOH. Use mulitchannel pipettor to add solutions. Spin 5 minutes at 2500 rpm. Decant supernatant. 8. Repeat 70% EtOH rinse. At this point, DNA can be stored in 70% EtOH in a parafilm sealed plate at –20АC for 4-5 weeks until proceeding with restriction enzyme digestion and Southern blotting. 9. Air-dry DNA.10. Resuspend the DNA in 50 Еls TE+RNase (1 Еl of 10 mg/ml RNase/100 Еl TE).11. There should be enough DNA (~10 Еg) in each plate for at least one digest and Southern Blot.Lysis Buffer: [Final] [Stock] [Еl Stock/5ml] 10 mM 1M Tris (pH 7.5) 50 Еl 10 mM 0.5M EDTA (pH 8.0) 100 Еl 10 mM 5M NaCl 10 Еl 0.5% 10% SDS 250 Еl 1 mg/ml 10 mg/ml Proteinase K in H20 500 Еl ddH20 to volumeNote: standard protocols detailed in Gene Targeting edited by A. Joyner and in Manipulating the Mouse Embryo Edited by A. Nagy et al. We advise you to read the protocol carefully before embarking on the screening012378@ACGL–O S T f  D v | ђ.ЁятдЩЙЉЙœ’ŠuŠi^ŠVPVŠVŠGŠh”YЪ5OJQJ hKG^JhKGOJQJh OJPJQJo(h h OJQJo(hKGOJPJQJhKGOJPJQJo(h”YЪOJQJh”YЪCJOJQJh hb1ЗOJQJaJh h”YЪOJPJQJaJo(h hb1ЗOJPJQJaJo(hbSяh”YЪOJQJhbSяh”YЪ5OJQJ^JhbSя5OJPJQJ^JhbSяhbSя5OJPJQJ^J238ABCюE F М О D F И К 7 d e Н -.@AŽњњњњњњыщщкщщщщщщщщщщщщщщщ„р„ ўWD8џ^„р`„ ўgdKG„а„0§WDдў^„а`„0§gdKG$a$=ўŽсёђ/0Sv‘Еуїј=§§§§§їїїїїїїїїїЦT€ЁЎйкъыїјў+GdЬ<=ј№ч№ч№пдЪМЪМЪКА№hBhOJPJQJUh‹Rh‹R6OJPJQJh‹ROJPJQJh‹ROJPJQJo(hBhOJQJh”YЪH*OJQJh”YЪOJQJh1=†OJQJ. If you have any questions, please feel free to contact us.,€Аа/ Ар=!А8"А8#`$`%ААаАа аtКѓ~lд—њ€Ш‚h~tКѓ~lд—њ€Ш‚h~tКѓ~lд—њ€Ш‚h~tКѓ~lд—њ€Ш‚h~tКѓ~lд—њ€Ш‚h~tКѓ~lд—њ€Ш‚h~†œD@ёџD ck‡e$CJOJPJQJ_HmH nHsH tH$AђџЁ$ иžЄ‹Еk=„W[SOFiѓџГF nfhˆЁЅФЪчыv < *€urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags€chmetcnv€; *€urn:schemas-microsoft-com:office:smarttags€chsdate€ Д џ€.5€0€1€10€20€2012€4€5€55€6€Day€False€HasSpace €IsLunarDate €IsROCDate€m€mm€Month€Negative €NumberType €SourceValue€TCSC€True€UnitName€YearАџC                    •™ЉЎЛНїџ$,T]qu|~”–]_imt€‰рф'АЙЩЫЬд]bŸЁІЊТФхчь№3=vЗУяі)/„M[RWbcv3333333  $*+01•–ЄЄTfžžІЉ abcsvv х KGBh‹R1=†нzЋb1З”YЪbSяџ@€bbl•€bb4kk7tP@P P@P8@џџUnknownџџџџџџџџџџџџG‡z €џTimes New Roman5€Symbol3& ‡z €џArial;†‹[SOSimSun?& ‡ŸArial Black;& ‡z €џHelvetica3‡z €џTimes qˆаhrZЕІrZЕІі~ і~ БЅРДД€24dqq%2ƒqмHX)№џ?Јџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџb1З2џџES Cell DNA Protocol Jan PotterUSER$+v  0@P етёi г№Z'™Е`МЄЖIгяZ'™Еўџр…ŸђљOhЋ‘+'Гй0lˆАМамь ќ ( 4@LT\dЈES Cell DNA Protocol Jan PotterNormalUSER2Microsoft Office Word@@”KЏn“Ч@”KЏn“Чі~ўџеЭеœ.“—+,љЎ0И X`x€ˆ ˜ ЈАЈUT Southwestern qФ  ўџџџўџџџ !"#ўџџџ%&'()*+ўџџџ-./0123ўџџџ§џџџ6ўџџџўџџџўџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџRoot Entryџџџџџџџџ РFй,Мn“Ч8€Data џџџџџџџџџџџџ1TableџџџџЭWordDocumentџџџџ.SummaryInformation(џџџџџџџџџџџџ$DocumentSummaryInformation8џџџџџџџџ,CompObjџџџџџџџџџџџџmџџџџџџџџџџџџўџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџџўџ џџџџ РFMicrosoft Office Word ЮФЕЕ MSWordDocWord.Document.8є9Вq